Question

观察细菌形态时为什么要用染色法

Answer 1

观察细菌形态时为何要用染色法？因为细菌细胞微小,透明,不易观察,需染上颜色.利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构.
常用的染色法有：
1．简单染色法：简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法， 一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、 结晶紫对细菌进行染色。美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检
涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim
2．革兰氏染色法：
革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。它是细菌学中很重要的鉴 别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G － ）两大 类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检
阳性菌：紫色； 阴性菌：红色

Answer 2

观察细菌的个体时，一般利用光学显微镜，在镜下观察的一般都是单一的细胞。很少有细菌自身产生色素，所以细菌的主要结构都是透明的。细胞器与胞质由质膜（plasma membrane）分隔成为独立的环境，质膜的脂双层结构中的光速与胞质中的光速具有差异，可见光在质-膜交界处发生折射，表现为肉眼不能识别的相位差。
染料的分类主要有亲电染料和亲核染料两种，分别具有结合电子和原子核的趋势。细胞内不同类型的结构很容易被不同染料染成方便区分的颜色，有利于光镜下的观察。
活体细胞的质膜具有生物活性，也就是选择透过性。生物染料不能透过这层屏障，对细菌染色前要经过固定的步骤。固定（fixation）是指对细胞的各种结构进行定形与固型，同时对细胞个体进行灭活，使染料分子可以顺利透过质膜。蛋白质是各级结构含有的主要的具有生物活性的物质，蛋白质变性后形态结构不易改变，很容易保存细胞结构的原有形态，以利于观察
观察细菌的形态时，有些具鞭毛细菌可以有运动性，另外还有细菌具有性菌毛。观察这些结构需要在细菌存活状态下，就不能够进行染色了。这时我们一般利用暗视野显微镜，观察细菌的轮廓结构；以及相差显微镜，将折射光的相位差转化为肉眼可见的振幅差（光强），观察细胞器的结构形态