Question

在基因工程中,标记基因是怎么标记的?同位素标记法?

Answer 1

标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否；在基因定位意义上来说，它是对目的基因进行标志的工具，通常用来检测目的基因在细胞中的定位。
举例
1、“作为重组DNA载体的重要标记”举例：大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因（该基因可以认为是标记基因），当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当人们用选择培养基（比如含有青霉素的培养基），来培养受体细胞时，能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA，标记基因就起作用了。
2、“作为目的基因的细胞定位工具”举例：通过将可定位检测的标记基因（只要已知其序列，既可针对设计标记探针，从而对其进行细胞定位）与目的基因进行连锁，当成功转化目的基因，该基因同时有成功表达后，既可间接对其进行定位；或者已知目的基因（该基因本身就处于某细胞中）周边序列，通过针对这些序列设计可插入标记基因，继而对该标记基因进行检测，也可间接对目的基因定位。

Answer 2

在基因工程意义上来说，它是重组dna载体的重要标记，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当人们用选择培养基（比如含有青霉素的培养基）；或者已知目的基因（该基因本身就处于某细胞中）周边序列，通过针对这些序列设计可插入标记基因，继而对该标记基因进行检测，也可间接对目的基因定位，从而对其进行细胞定位）与目的基因进行连锁，当成功转化目的基因，该基因同时有成功表达后，既可间接对其进行定位，通常用来检验转化成功与否；在基因定位意义上来说标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用，来培养受体细胞时，能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源dna，标记基因就起作用了。
2、“作为目的基因的细胞定位工具”举例：通过将可定位检测的标记基因（只要已知其序列，既可针对设计标记探针，并被转入受体细胞后：大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因（该基因可以认为是标记基因），当这种质粒与外源dna组合在一起形成重组质粒，它是对目的基因进行标志的工具，通常用来检测目的基因在细胞中的定位。
举例
1、“作为重组dna载体的重要标记”举例

Answer 3

额，标记基因的用途首先要弄懂，一般是带有抗生素抗性的，或者是可以通过染色等手段能检测到其产物的一些基因序列；目的，为了方便在构建载体时阳性的筛选以及体外扩增、转化。
如果用同位素标记，当你标记了某一基因序列后，这一基因被重组到了受体基因组体内，仅仅是这一基因被重组了，但是在表达的时候由于细胞寿命有限，它要进行不断地复制，最终死亡分解，你转入基因的同位素会随着细胞的繁衍而消失看不到同位素标记，这就回答了你的所有问题；至于杂交检测时，基因整合到受体的基因组中并不代表它会表达，所以通过目的基因的表达从一个表达的水平检测目的基因的表达。

Answer 4

从你对问题的描述中，看得出你对DNA分子杂交过程是有所了解的，这点就不和你解释了。至于你说的直接标记目的基因，其实是不可行的，没有任何方法能够直接做到这一点。因为你把含有同位素的底物（dNTP）用来培养细胞，同位素涉入到DNA中的位置是随机的，也就是只要新合成的DNA都可能摄入进去同位素，如何控制同位素只渗入到目的基因？所以，这个方法能将所有的基因都标上同位素，区分不出来目的基因。另外，DNA分子杂交技术并不破坏基因，只是检测已经存在的特定片段。

Answer 5

标记基因是抗性基因或者荧光蛋白基因。
如果受体细胞能抵抗相应的抗生素，或显示荧光效果，就证明标记基因已被导入受体细胞且正常表达，那么目的基因同样也是。
采用同位素标记的话，如果被导入，但是没有表达或dna被破坏，细胞同样可以检测到放射性。
不准确。