Question

制备目的基因的方法有哪些

Answer 1

制备目的基因主要依靠基因合成和基因分离两种方法；

目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法。1969年贝克威思(J.Beckwith)等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA，以后有不少科学家用生物学方法、物理化学方法分离出许多纯化的基因。但总的来看为数不多。 

1970年首次完成了77对碱基的酵母丙氨酸tRNA基因的全合成;1973年又合成了126对碱基的酪氨酸tRNA的结构基因。但上述两次合成的基因都不能得到表达。1976年8月成功地合成了能表达功能的人工基因——193对碱基的大肠杆菌酪氨酸tRNA基因。自此以后人工合成基因的报道不断出现。

扩展资料：

目的基因相关的操作包括目的基因鉴定、分离、克隆、转化及转化后鉴定和测试等。通常，目的基因要么是已知供体生物基因组“文库”的一部分，要么是来自于先前未研究过的供体生物基因组。无论是哪种情况，聚合酶链式反应（PCR）技术都可以是目的基因倍增至生成构建体所需的数百万拷贝的水平。

当产生许多拷贝的目的基因后，可以通过酶切反应（或gataway系统），将目的基因酶促连接到构建载体中，然后将整个构建在细菌中表达，从报告基因选取阳性转化体，通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落，做液体培养，提取质粒DNA，进行酶切，切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。