DNA精提取

1个回答

天生不想做庸医

专业答主服务有保障

关注

展开全部

摘要 DNA提取的完整步骤1．取新鲜或冷冻样品的肌肉组织100ul-200ul或95%ALC保存的样品组织0.05g。2．将组织尽量剪碎，分别装入1.5ml 的离心管中。3．每管中加入450ul的裂解缓冲液(10mM Tris-HCl pH8.0; 100mM EDTA, pH8.0)4．每管加入10% SDS 50-100ul(70-80不定) (1-2%),再加入2.5-5ul（3ul）蛋白酶K (20mg/ml),是其终浓度达100ug/ml. 混匀，55℃3h至过夜（期间将管子颠倒几次）。5．样品中加入150ul NaCl（盐析作用），室温8000rpm离心20min，去沉淀，然后在上清液中加入等体积（500ul）预冷异丙醇（沉淀DNA），混匀，20℃处理30min，14000rpm离心10min，去上清液。沉淀加70%ALC洗涤离心去ALC，室温挥发ALC5-10min，加TE 500ul，加10ul RNAase (终浓度4mg/ul)，即2.5ul。37℃ 30min 或65℃ 15min。6．加等体积酸液（提取DNA中的蛋白质）缓

咨询记录 · 回答于2022-12-04

DNA精提取

您好，您想问关于这个什么问题

DNA提扮缺取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生瞎谈物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式厅神辩的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。基本信息

具体您是要做实验吗

是的，但我不太清楚据体流程

好，我给你查下

DNA提取的完整步骤1．取新鲜或冷冻样品的肌肉组织100ul-200ul或95%ALC保存的样品组织0.05g。2．将组织尽量剪碎，分别装入1.5ml 的离含毁心管中。3．每管中加入450ul的裂解缓冲液(10mM Tris-HCl pH8.0; 100mM EDTA, pH8.0)4．每管加入扮念10% SDS 50-100ul(70-80不定) (1-2%),再加入2.5-5ul（3ul）蛋白酶K (20mg/ml),是其终浓度达100ug/ml. 混匀，55℃3h至过夜（期间将管子颠倒几次）。5．样品中加入150ul NaCl（盐析作用），室温8000rpm离心20min，去沉淀，然后在上清液中加入等体积（500ul）预冷异丙醇（沉淀DNA），混匀，20℃处理30min，14000rpm离心10min，去上清厅老困液。沉淀加70%ALC洗涤离心去ALC，室温挥发ALC5-10min，加TE 500ul，加10ul RNAase (终浓度4mg/ul)，即2.5ul。37℃ 30min 或65℃ 15min。6．加等体积酸液（提取DNA中的蛋白质）缓

1．取95%乙醇保存的组织0.05g，放入500ul的蒸馏水中浸泡半天，再换一次蒸馏水浸泡半天。2．将组织尽量剪碎，放入盛有450ul裂解缓冲液（TE）的1.5ml 离心管中（10mM Tris-HCl，pH8.0，10mM EDTA pH8.0）3．每管中加入10%的SDS 50-100ul （80ul），（1-2%），再加入2.5-5.0ul（一般4.0ul或5.0ul）蛋白酶K（20mg/ml），使其终浓度达100ul/ml，混匀。55℃水浴 3小时至过夜(期间将管子颠倒几次)，加2.5ul RNAase,37℃ 30min或65℃ 15min，（RNAase易降解，一般不许再加RNAase，形成沉淀）。4．样品中加入150ul NaCl，室温4000rpm离心20min (T=15℃)，去沉淀，然后在上清液中加入等体积酚液（提Pr）。缓慢颠倒离心管10min，13000-15000rpm离心10-15min，用移液管大口Tip头小心取出上层水相至另外干净的离心管中，不要触到两相间的白色蛋白层。5．再上清含知液中加入于冷得等体积异丙告锋醇（沉淀DNA)，混谈友消匀，20℃处理3

按照这个步骤来就可以

已赞过

评论收起