ELISA实验操作中注意事项有哪些
2017-06-20 · 专注各类elisa试剂盒、血清抗体
南京金益柏生物科技有限公司
1.储存.
收到试剂盒后应尽快放入冷藏室内保存,保存温度为4℃-8℃.
2.回温.
试剂盒在使用前应于室温（22-27℃）下充分回温,回温时间为40-60分钟.回温过程中勿将酶标板的包装袋开封,回温结束后再将其从包装袋中取出使用.
3.样品稀释.
样品稀释应严格按照说明书要求的稀释倍数进行稀释.如稀释倍数过大,可采用多步法进行样品稀释.例如：试剂盒要求样品需进行500倍稀释,可吸取5μl样品加入245μl样品稀释液中,充分混匀后,再吸取10μl混合液加入90μl样品稀释液中即可.
4.加样.
稀释好的样品在加入酶标板进行孵育的过程中,尽可能缩短第一次加样和最后一次加样的时间间隔,样品加好后马上开始计时.
5.洗板.
样品孵育时间结束后,马上甩去孔内液体.如多块酶标板需同时洗涤,可先将板内液体甩去,倒扣于吸水纸上,再依次进行洗涤.使用洗板机洗涤时,建议洗涤次数增加一次.未用完的洗涤液可在4℃-8℃下密封保存1月.
6.显色.
底物药片可在显色前3-5分钟加入底物缓冲液中,混合直到完全溶解.本试剂最好是现用现配,未用完的底物溶液可在4℃-8℃下避光保存1周.
7.终止及读数.
提前打开酶标仪,加入终止液后立即读数.
8.同批号试剂盒中的试剂,除酶标二抗及阳性对照外,其余均可通用.
9.移液器的正确使用、保存、清洁、校对.
10.实验室管理
桌面保持整洁,插枪头戴手套等.
ELISA实验操作中注意事项主要包括以下几点：
试剂准备与储存：
确保试剂盒在有效期内使用，并严格按照说明书进行试剂配制。
配制好的试剂应存放于4℃冰箱中，并尽快使用，避免反复冻融。
试剂盒应存放于干燥、阴凉处，避免阳光直射和高温。
实验操作环境：
严格控制实验温度，一般要求在20-25℃，避免发生酶标板结霜及出现冷凝水。
保持实验室干燥，避免潮湿环境对实验结果的影响。
实验前洗手，避免手部细菌或病毒对实验结果的影响。
加样与孵育：
加样时应保证加样量的准确性和一致性，避免加样误差。
孵育时间需严格控制，确保实验结果的准确性。
加样及孵育过程中，应避免产生气泡或溅出，以免影响实验结果。
洗涤步骤：
洗涤是ELISA实验中非常关键的步骤，需严格按照说明书操作，不减少洗涤次数和洗涤时间。
注意洗涤液的量和清洗次数，避免洗液不足或清洗次数不够对实验结果的影响。
洗板时力度和速度要适中，避免对酶标板造成损坏。
显色与终止：
显色和终止时需严格控制反应时间和温度，确保反应的完全和稳定。
注意观察颜色的变化情况，及时采取相应的措施终止反应。
实验器具与废液处理：
实验过程中要轻拿轻放酶标板等器具，避免撞击或振动。
实验后的废液需按照实验室规定进行分类处理，避免对环境和人体造成危害。
实验记录与结果分析：
实验过程中要详细记录每一步操作和结果，以便后续的分析和处理。
对实验结果进行重复验证和数据分析，确保结果的准确性和可靠性。
综上所述，ELISA实验操作中需要注意多个方面，从试剂准备到实验记录，每一步都需要严格操作和控制，以确保实验结果的准确性和可靠性。
