质粒提取的注意事项
1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。
2、RNA的去除，首先是使用RNase消化。在溶液I中加入高浓度的RNaseA(100ug/ml)，或者用含25ugRNaseA/mlTE溶解抽提好的质粒，都可以降低RNA残留，但都不能彻底去除。
3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于4C一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。
首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。
质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，获得的质粒可以用于常规的载体构建，一般适用于5ml以下菌液。
而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。
扩展资料
质粒提取的原理：质粒抽提的步骤原理即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。最常用的方法是碱裂解法,即在强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性。
在pH中性，并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后。
再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。优点为操作过程简单，快速，获得质粒浓度高，目前被广泛使用。
参考资料来源：
利穗科技
2024-04-23 广告
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