Question

初二下学期苏教课后问题。转基因抗虫烟草培育过程

初二下学期苏教课后问题。转基因抗虫烟草培育过程

Answer 1

应用农杆菌介导法的烟草转基因实验
一、实验目的
烟草是遗传转化的模式植物，已经建立了一套完善的转化再生体系。本实验以烟草为实验材料，使同学们了解根癌农杆菌介导法的基本原理和一般步骤，掌握遗传转化的基本操作技术。
二、实验用具及药品
烟草叶片，LBA4404质粒载体，摇床，培养皿(带滤纸)，移液枪，镊子，手术刀，无菌水
三、实验方法
根癌农杆菌介导转化的方法已经比较成熟，易于在植物细胞和组织培养实验室进行。具体操作程序如下：
(1)根癌农杆菌质粒的保存：构建好的根癌农杆菌质粒接种在YEP固体培养基上，YEP固体培养基的成分为每100mL含NaCl 0.5g，酵母1 g，水解酪蛋白1g，琼脂1.5g，pH值7.0，在冰箱中冷藏，一个月换一次培养基，保证菌种正常生长。
(2)配制YEP液体培养基：成分同上，只是不添加琼脂，分装于试管中，每试管加入5mL左右的液体培养基，包好后高压灭菌，放置于冰箱中待用。
(3)摇菌：用灭菌后的牙签或者火柴棍等挑出一些菌液，一起放入上述YEP液体培养基中，然后置于振荡器上摇菌16—17h(180r／min)，直至溶液变浑浊，即有大量菌丝长出。
(4)用消毒后的0.5mm打孔器从叶片上切出叶盘，然后将叶盘投入农杆菌悬液中培养5min
(5)用滤纸吸干多余的菌液，叶片放在MS+6-BA 1.0 mg/L十IAA 0.1 mg/L培养基上共培养2d，随后转至附加卡那霉素100mg/L，羧苄青霉素500 mg/L的培养基上筛选培养，(25±1)℃，16h光周期。
(6)2周后分化出卡那霉素抗性芽（应为绿色），从基部将芽切下，转至含100mg/L卡那霉素和500 mg/L羧苄青霉素的MS+0.1 mg/LIAA上生根培养，生根后的植株移入温室内栽培。
四、预期结果
愈伤组织：一周后在脱分化培养基上长出淡黄色、松散的愈伤组织。
幼芽：愈伤组织转入分化培养基两周后分化出卡那霉素抗性芽。
生根：芽转入生根培养基后可以生根。
五、作业要求
诱导出烟草愈伤组织并能够再生植株。每小组交出两三株再生并生根的烟草转基因植株。