Question

要从土壤中分离得到单菌落微生物,该如何设计实验?

Answer 1

要从土壤中分离得到单菌落微生物，实验步骤如下：

1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基500ml （用于12个平皿和10支试管斜面）。倒12个平板和10支试管斜面，包扎，121℃灭菌20min.

2、制备土壤稀释液：称取土样10g，放入盛有100ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min 使土和水充分混合。

然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001不同稀释度的土壤溶液。

3、涂布培养：以0.01以及0.0001两个浓度的土壤稀释液作为涂布平板培养的对象，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基中，共6个培养基，标号，37°C温箱培养48 h。

4、划线分离（划线培养）：对两种土壤溶液的微生物培养基进行观察，记录两种区分明显的细菌性状。挑取此两种细菌在新的培养基中划线培养（每种细菌培养3个培养皿），标号、37°C培养。

5、初步鉴定：对两种菌进行简单染色、革兰氏染色以及芽孢染色观察，记录结果。

6、试管斜面再培养：将两种纯菌株接种分别接种在5支试管中，共10支试管。37°C培养（18－24h）。

7、对试管中培养的两种菌进行生理生化鉴定。