Question

蛋白标签在现代生命科学中主要有哪些用途

Answer 1

目前重组表达的蛋白主要加的标签有GST和His标签便于分离纯化。如pGEX载体系统含有谷胱甘肽转移酶（GST）基因，可将外源基因插入其中，使其表达产物带有GST的融合蛋白。利用GST-Agarose亲和层析柱对表达的蛋白进行分离纯化。如果需要时，可用凝血酶或Xa因子将目的蛋白从融合蛋白上切下来。pET-28a等载体上含有6个His，将目的基因插入这些表达载体中，这样表达的产物含有poly-his的tag可利用Ni离子的亲和柱进行分离纯化，纯化后的融合蛋白可用factorXa等特异性较高的酶切下来。另外一个重要的作用是使很多对宿主菌具有抗性或者毒性的蛋白能够进行表达，比如说你要表达一个抗菌肽cecropin,直接进行表达是不可能的，如果它表达的话就把宿主菌杀死或者抑制了宿主菌的生长，那就只好加一个标签蛋白改变一下它的性质，等拿到融合蛋白之后再通过用凝血酶或者肠激酶的定点切割把目的产物和担体蛋白分开，当然，在设计的时候要注意尽可能少引入冗余的氨基酸以避免影响靶蛋白的生物活性，仅供参考。TAG的功能主要有2个,1:方便纯化,常见的TAG有GST,HIS,CBD,可选用相应的亲和柱纯化2:增强蛋白质可溶性,原核系统中表达经常出现表达产物是包涵体形式,加上一些TAG可以起一定的作用,增强目标产物的可溶性.改变蛋白质性质这一点并非完全如楼上所说,有TAG抗菌肽也可能有活性,TAG一般是以不影响融合蛋白折叠为基础设计的,而且不一定杀死宿主,抗菌肽是与细胞膜作用的,在胞内作用没什么作用,有酶切位点的融合蛋白也是为了方便得到纯的目标蛋白，可以在亲和柱内酶切,切下来的基本上就是目标蛋白的天然序列了.详情可问↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓

Answer 2

目前重组表达的蛋白主要加的标签有GST和His标签便于分离纯化。如pGEX载体系统含有谷胱甘肽转移酶（GST）基因，可将外源基因插入其中，使其表达产物带有GST的融合蛋白。利用GST-Agarose亲和层析柱对表达的蛋白进行分离纯化。如果需要时，可用凝血酶或Xa因子将目的蛋白从融合蛋白上切下来。

pET-28a等载体上含有6个His，将目的基因插入这些表达载体中，这样表达的产物含有poly-his的tag可利用Ni离子的亲和柱进行分离纯化，纯化后的融合蛋白可用factorXa等特异性较高的酶切下来。

另外一个重要的作用是使很多对宿主菌具有抗性或者毒性的蛋白能够进行表达，比如说你要表达一个抗菌肽cecropin,直接进行表达是不可能的，如果它表达的话就把宿主菌杀死或者抑制了宿主菌的生长，那就只好加一个标签蛋白改变一下它的性质，等拿到融合蛋白之后再通过用凝血酶或者肠激酶的定点切割把目的产物和担体蛋白分开，当然，在设计的时候要注意尽可能少引入冗余的氨基酸以避免影响靶蛋白的生物活性，仅供参考。

TAG的功能主要有2个,1:方便纯化,常见的TAG有GST,HIS,CBD,可选用相应的亲和柱纯化2:增强蛋白质可溶性,原核系统中表达经常出现表达产物是包涵体形式,加上一些TAG可以起一定的作用,增强目标产物的可溶性.

改变蛋白质性质这一点并非完全如楼上所说,有TAG抗菌肽也可能有活性,TAG一般是以不影响融合蛋白折叠为基础设计的,而且不一定杀死宿主,抗菌肽是与细胞膜作用的,在胞内作用没什么作用,有酶切位点的融合蛋白也是为了方便得到纯的目标蛋白，可以在亲和柱内酶切,切下来的基本上就是目标蛋白的天然序列了.

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