Question

DNA聚合酶有哪些活性？

Answer 1

Klenow：DNA聚合酶是emphasis：role=italicE.coliemphasis：DNA聚合酶I经裂解而除去全酶中的5′→3′外切活性的肽段后，所剩余的分子量为76ku大片段，而聚合活性和3′→5′外切活性不受影响，因此该片段也称为Klenow片段（Klenow：fragment），或emphasis：role=italicE.coliemphasis：DNA聚合酶I大片段（emphasis：role=italicE.coliemphasis：DNA：polymeraseI：large：fragment）。Klenow：DNA聚合酶的活性与emphasis：role=italicE.coliemphasis：DNA聚合酶I的活性是一致的，由于没有5′→3′外切活性，而在现代基因工程操作中使用范围进一步扩大。

Klenow：片段的主要用途是：①：补平限制酶切割DNA后产生的3′凹端；

②：用[superscript32superscriptP]dNTP对DNA片段的3′凹端进行末端标记；

③在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二链；

④应用Sanger双脱氧链末端终止法进行DNA测序。除了以上作用外，KlenowDNA聚合酶在cDNA克隆中合成第二链，随机引物标记，应用于PCR反应，在体外诱变中等也有非常重要的应用。