Question

质粒提取步骤

Answer 1

操作步骤 ：

（ 请自备 1.5mL 离心管、异丙醇、70%乙醇）

1.取 1-3mL 菌液，分次置于 1.5mL 离心管中，4000rpm 4℃离心 3min，彻底弃除上清。

2. 加入 0.5mL 溶液 A，充分振荡 2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心 3min，彻底弃除上清。

3. 加入 200μL 溶液 I 和 5uL 溶液 B，充分振荡 2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。

4. 加入 400μL 溶液 II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀 6 次，注意整个管子的内表面均需与溶液 II 接触，室温放置至溶液清亮。（若 5min 后溶液

未变清亮，说明菌体过多，应减少菌量。注意混匀手法要温和，切勿剧烈混合。）

5. 加入 300μL 溶液 III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀 8 次，4℃放置 5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）

6. 12000rpm 4℃离心 10min，小心吸出上清，轻移至新的 1.5mL 离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）

7. 加入 600μL 异丙醇，充分混匀，室温静置 10min。

8. 12000rpm 4℃离心 10min，小心吸弃上清，再将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余液体。

9. 加入 700μL 70%乙醇，温和震荡 30Sec，12000rpm 离心 3min，轻轻弃去上清。

10. 重复步骤 9 操作一次，将离心管倒置干燥吸水纸上 2min。

11. 将离心管敞口室温放置 2-5min，晾干沉淀。

12. 加入 40μL 溶液 IV，温和震荡 2min，使沉淀完全溶解。

BIOG质粒提取，毒性低、纯度高，可以做细胞转染。