Question

单克隆抗体的制备步骤

Answer 1

1、免疫动物的选择：

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合：

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养：

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。

5、单克隆抗体的大量制备：

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

扩展资料：

单克隆抗体的优点：

1、杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。

2、可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。

3、由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法。

4、由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。

参考资料来源：百度百科-单克隆抗体