关于提取血浆中RNA
我现在在做提取血浆中总RNA，检测microRNA表达，但是用trizol提取的RNA浓度不是很好，请问前辈们有好的建议，不胜感激！！！...
我现在在做提取血浆中总RNA，检测microRNA表达，但是用trizol提取的RNA浓度不是很好，请问前辈们有好的建议，不胜感激！！！
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1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。
b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。
4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.
6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。
11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。
注意事项
为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。
洗涤液含有刺激性化学物质
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。
b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。
4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.
6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。
11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。
注意事项
为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。
洗涤液含有刺激性化学物质
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中科雷鸣
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本回答由中科雷鸣提供
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我们实验室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT法提取血浆中的RNA，如果RNA浓度不高，就用3倍体积的无水乙醇、0.1体积的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀进行浓缩，或者直接用浓缩仪进行浓缩干燥
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