Question

简述对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面?典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤?

Answer 1

【答案】：(1)天然质粒存在着缺陷，必须对之进行改造构建：
①加入合适的选择标记基因，通常是抗生素基因。
②增加或减少合适的酶切位点，便于重组。
③缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。
④改变复制子，由严紧变为松弛型，以增加拷贝数。
⑤加装特殊的基因元件。
(2)DNA体外重组的基本过程：典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤：
①目的基因的提取：供体生物基因或称外源基因的提取
②限制性酶切：目的基因切成不同大小的片段
③酶接：连接到另一DNA分子上(克隆载体)
④转化：将这个重组DNA分子转入受体细胞
⑤筛选和鉴定：对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定
⑥基因表达：对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。[考点]质粒的构建和DNA重组实验的步骤。