Question

简述定量PCR的原理和过程

Answer 1

根据DNA扩增的目的和检测的标准，通常业界将PCR仪分为普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR仪、实时荧光定量PCR仪等四类。

1.普通的PCR仪器：主要是做简单的，对目的基因退火温度的扩增，主要应用于科研研究，教学，医学临床，检验检疫等机构；

2.梯度PCR仪可一次性进行PCR扩增，主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，主要用于科研，教学机构；

3.原位PCR仪用于细胞内靶DNA的定位分析，不但可以检测到靶DNA，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值；

4.实时荧光定量PCR仪实在普通PCR仪的基础上，增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，具有单通道、双通道和多通道之分，因一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量，主要用于医学临床检测、生物医药研发、食品、科研院校等行业和机构。

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Answer 2

半定量反转录－聚合酶链反应（semi-quantitative
reverse
transcription
and
polymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年来常用的一种简捷、特异的定量rna测定方法，通过mrna反转录成cdna，再进行pcr扩增，并测定pcr产物的数量，可以推测样品中特异mrna的相对数量。以半定量rt-pcr为基础建立起来的mrna含量测定技术，较含内标化的rt-pcr定量测定的mrna的方法更为简便可行。
这种方法不另设‘内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异，而且具有明显的剂量－效益关系和良好的重复性。
步骤：
1.抽提rna，2.反转录获得cdna，3.以cdna为模板做pcr
注意：
步骤1，rna抽提质量一定要好，注意污染。内参的选择，常用的有βactin和gapdh俩中。步骤3，半定量rt-pcr应该再两管中进行，既内参和目的基因各一管，这样便于控制，做图的时候可以放在一各泳道里跑！指数期和平台期一定要摸清楚！

Answer 3

过程其实和普通pcr一样，只是定量一般会加荧光染料（或荧光探针），整个过程是被仪器监控的所以能够实时的知道扩增的进度。最后根据标准曲线来定量的。

Answer 4

原理1;在含有插入性染料或特异性探针的体系中扩增目标序列.
2
光学系统激发并检测报告荧光
3
报告荧光的强度与所扩增DNA的量呈比例关系
过程和普通PCR差不多，不过引物设计比较复杂，使用的仪器也不一样，在对数期检测。