Question

测RNA浓度 A260必须在1以内?

Answer 1

不是，测RNA浓度A260一般是在10μl的RNA原液取1μl。

提取RNA测浓度时，A260/A280一般对于DNA，纯净的时候比值是1.8，而对于RNA则是接近2.0。如果超过这个值，那么最有可能的就是核酸降解了，因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大，所以会使比值上升。

A260 / A280比值应大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间。

RNA浓度测试注意

比值降低往往是样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等。但实际样品情况往往要相对复杂，如《分子克隆实验指南》(第三版)所述，当 0.5％BSA蛋白质污染时，A260和A280的数值都下降，其结果是260/280的比值略微下降。

但同时，蛋白残留会导致A230的数值明显上升，进而显著影响260/230的比值。也就是说，如果样品的260/280比值略低于标准值，但260 /230下降明显，那么就应该考虑污染原因是蛋白残留，而不是胍盐残留。