传代培养的培养细胞
在口腔医学领域,尽管人们已经能够重新构建牙冠结构,然而重新构建结构复杂的牙根始终是不少科研人员的终极梦想。第四军医大学口腔医院文玲英教授等在一项国家自然科学基金资助课题中,培养出了纯化的牙囊细胞,尽管这离重新构建牙根还有很长的距离,但毕竟又向前迈了一步。 牙囊是牙胚的重要组成部分,随着牙齿的发育,由它分化的细胞形成牙骨质、牙周膜和部分牙槽骨,换句话说,由牙囊发育的组织结构主要负责将牙齿固定在牙槽骨上。另外在牙齿萌出的过程中,牙囊细胞还可能通过对一些细胞和因子进行调控,促进牙齿的顺利萌出。
牙囊细胞的重要功能吸引了研究者的目光,但要进行深入的研究就需要首先分离出纯化的牙囊细胞。早在上世纪90年代,国外就已经开展了分离牙囊的研究,但由于牙囊与成釉器(上皮来源)“关系密切”,始终难以简便地获得纯化的牙囊细胞。
据研究人员刘晓辉介绍,牙囊细胞和成釉器分别来源于外胚间充质和口腔上皮,这两类细胞在培养时对培养皿具有不同的黏附能力,当使用胰酶消化时,黏附能力较差的牙囊细胞会首先掉下来,成釉器上皮细胞则要慢一些,这就是差速消化的概念。利用差速消化法,收集牙囊细胞并进行传代培养,就称为差速传代技术。经3~4次差速传代,最终就可以得到纯化的牙囊细胞了。
在研究过程中,他们选用大鼠第一和第二磨牙牙胚,剥离出牙囊和成釉器作混合培养,经3次差速传代后,成功地从第4代牙胚原代细胞中获得了纯化的牙囊细胞。经细胞形态学及免疫化学染色检测结果显示纯化率达100%,细胞生长状态良好,增殖旺盛。
文教授说,差速传代培养技术是一种很有效且操作简单、廉价的研究方法,培养的高纯化牙囊细胞为今后牙齿组织工程提供了种子细胞,下一步他们准备将纯化牙囊细胞应用于牙根的重新构建研究中。