pcDNA3.1重组质粒用脂质体转染原代培养细胞能稳定表达吗
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pcDNA3.1重组质粒用脂质体转染原代培养细胞能稳定表达
真核表达载体pcDNA3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7细胞中瞬时表达
【摘 要】 目的 构建β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme,BACE）基因的真核表达载体,为修复阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)损伤神经元奠定基础.方法 采用RT-PCR方法,从人的成神经细胞瘤的总cDNA中,扩增出1.5kb的BACE cDNA片段,再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒；以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况.结果 人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1质粒中；经脂质体转染COS-7细胞后,并由潮霉素进行筛选,可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达.结论 成功构建了pcDNA3.1-BACE的真核表达载体,为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE,为治疗AD奠定一定的实验基础.
真核表达载体pcDNA3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7细胞中瞬时表达
【摘 要】 目的 构建β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme,BACE）基因的真核表达载体,为修复阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)损伤神经元奠定基础.方法 采用RT-PCR方法,从人的成神经细胞瘤的总cDNA中,扩增出1.5kb的BACE cDNA片段,再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒；以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况.结果 人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1质粒中；经脂质体转染COS-7细胞后,并由潮霉素进行筛选,可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达.结论 成功构建了pcDNA3.1-BACE的真核表达载体,为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE,为治疗AD奠定一定的实验基础.
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利穗科技
2024-04-23 广告
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