Question

对基因片段进行测序的目的，以及直接测序和克隆测序的区别和适用条件！基础有点薄弱，谢谢赐教！

Answer 1

问题太多了，不知道从何答起啊
测序的目的就不用说了吧，无非就是想知道这段序列到底是什么，是不是我想要的序列，是不是想序列；
直接测序是指：用PCR产物直接测序；PCR产物直接测序有两大优点∶一是操作易于标准化与自动化，因为它是一个单一的酶的反应过程，不依赖于生物体；二是通过一次测序反应就能确定样品中某个等位基因的顺序，而PCR产物克隆后测序时，样品顺序要在测定了数个克隆片段之后才能确定。因为只有这样，才能区别突变是基因组本来就有的，还是由于Tag聚合酶在PCR过程中错误掺入核苷酸引起的。
克隆测序是指：将你要测序的片段插入到克隆载体中，获取还有待测片段的质粒，然后直接送测序公司测序 。

二者适用的方面：如果你只是要部分序列，直接进行PCR，产物送测序公司测序；如果你要得到全长序列，就把PCR产物进行TA克隆，将阳性菌液或者自己提取质粒然后送测序公司测序或者自己把质粒PCR后再交给测序公司测序。