Question

关于酵母菌摇床培养被细菌污染的问题？

我们生产酵母菌，原来用四层绒布封口1000ml的三角瓶（里面装250ml豆芽汁培养基），摇床培养3天，做了一个ck，不加任何菌。3天过后涂平板ck里面细菌在千万级左右，酵母菌中也有细菌。后来在培养基里面加氯霉素，细菌与酵母菌的比值在1：1000左右或以下，但酵母菌大量减少从5-10亿/ml到1-2亿/ml。最后老板买来了硅胶塞，我在实验室下做了2次实验，空白对照有：不加任何菌的带硅胶塞的三角瓶（ck0），加酵母带绒布的三角瓶（ck1，ck2，ck3）；实验组：加酵母带硅胶塞的三角瓶（1，2，3）（酵母菌有3种，每个接一个三角瓶）。同等条件下培养3天，后涂平板用不加氯霉素的PDA培养基检测。检测结果：ck0（稀释一个次方）：无任何菌生长；ck1，ck2，ck3：酵母菌在5亿/ml以上，细菌在500万左右；实验组1，2，3：只有酵母菌，酵母菌数2亿/ml左右。后来我们在摇床上培养酵母，接了20个三角瓶用硅胶塞。3天过后，将20个三角瓶的酵母菌液混在一起，用牛肉膏蛋白胨涂平板检测细菌在1000万以上。现在就是不知道这是怎么回事?硅胶塞应该可以阻止细菌进入三角瓶。但是那些细菌从哪儿来的呢？我前期做的2次实验用硅胶塞的都没有细菌（每次只接了3瓶)，为什么接20瓶后就有了细菌呢？是操作上的问题吗？

Answer 1

1、四层绒布封口是不够的，而且绒布吸水，在灭菌或者摇床的时候可能会沾上液体，成为细菌通过的通道。你一定要用绒布的话，可以在里面加棉花塞，要未脱脂的棉花。

2、3瓶不染菌不代表20瓶也不会染菌。举例：假设用硅胶塞时染菌率是4%，那么你实验的3瓶都不染菌的几率大约是90%；如果你做20瓶的话，不染菌的几率只有45%左右。所以做3瓶不染菌，而做20瓶却染菌了是很正常的。