测定DNA浓度时A230/A260代表什么意思
A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内;
如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素(如移液不准确，样品内有悬浮物等)影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。
(请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1)。
A230产生负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。
A260/A280比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯 RNA的A260/A280比值为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。
A260/A230比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA和RNA的A260/A230比值为 1.8 – 2.2。若比值桥乎小于1.8表明样品被碳水孙猜化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。当 260/230<1 时，通常只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。
扩展资料：
当我们获得了Micro Drop超微量分光光度计检测结果后，对光谱的正确分析至关重要。
输出结果的含义：
1. A260nm——核酸zui高吸收峰的吸收波长。敏凯悉
2. A280nm——蛋白zui高吸收峰的吸收波长。
3. A230nm——是碳水化合物zui高吸收峰的吸收波长。
4. A340nm——是基线校准波长，为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，表明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A340一般是0。
参考资料来源：百度百科 ——脱氧核糖核酸
11
2024-08-28 广告
1，A260nm：是核酸最高吸收峰的吸收波长。
最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样悔纯品的A260 吸光度值是否>0.1。
2，A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长。
比值可进行核酸样品纯度评估。纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。
扩展资料：
测定DNA浓度时其他数字符号表示的意思：
1，A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液
2，A320nm或A340nm
为检测溶液样品贺姿的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。
3，A260/A280和A260/A230
（1）是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280 nm。纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
（2）A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核禅前绝酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能.可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链燃雀DNA,以及RNA.核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm.每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同.定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数.如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig.测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度.测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液.然而,实验并非一帆风顺.读数不稳定可能是实验者最头痛的问题.灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大.
事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度.如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）.这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的.另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等：在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数.样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品.这些皮颤早小颗粒的存在干扰测试效果.为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A.在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定.从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高（超过光度计的测试范围）.最后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值；混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项.
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm.纯净的样品,比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）.如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物洞歼质的影响.A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0.A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子.纯样品,A320一般是0.
