我的样品是从肝胰脏提取的。用的方法是trizol的方法。 此方法沉淀出蛋白后，最后是用1%的SDS进行的回溶。 30
我的样品是从肝胰脏提取的。用的方法是trizol的方法。此方法沉淀出蛋白后，最后是用1%的SDS进行的回溶。我用G-250考马斯亮蓝法测得蛋白浓度为12mg/ml我的目的...
我的样品是从肝胰脏提取的。用的方法是trizol的方法。
此方法沉淀出蛋白后，最后是用1%的SDS进行的回溶。我用G-250考马斯亮蓝法测得蛋白浓度为12mg/ml
我的目的蛋白条带在77kDa左右，所以我选取的胶浓度为3%浓缩，10%分离。样品处理是取10ul样品加入等体积2Xbuffer。煮沸5分钟，离心。加样量是8ul
浓缩胶60V电压，分离胶100V。
染色是用考马斯改良配方
G250
硫酸铵
磷酸
乙醇
含量
0.12%
10%
10%
20%
500mL
0.6g
50g
50 mL
100 mL
这个方法染色后用纯水脱色就可以。我在做Native电泳的时候这个染液很好用。但是现在做组织提取的蛋白，发现染不上色。最初marker也无条带。后来微波加热了下，发现marker有2个条带，其余不清楚。我的蛋白样品无任何条带。
问：
1。提取的蛋白用考马斯方法测量的出含量。就是说一定有蛋白吧
2。我的上样量为8ul，相当于蛋白每个上样量为50ug左右。是不是少？
3。实验方法存在问题吗
希望大家多给予帮助，我的毕业论文，现在很干急。谢谢 展开
此方法沉淀出蛋白后，最后是用1%的SDS进行的回溶。我用G-250考马斯亮蓝法测得蛋白浓度为12mg/ml
我的目的蛋白条带在77kDa左右，所以我选取的胶浓度为3%浓缩，10%分离。样品处理是取10ul样品加入等体积2Xbuffer。煮沸5分钟，离心。加样量是8ul
浓缩胶60V电压，分离胶100V。
染色是用考马斯改良配方
G250
硫酸铵
磷酸
乙醇
含量
0.12%
10%
10%
20%
500mL
0.6g
50g
50 mL
100 mL
这个方法染色后用纯水脱色就可以。我在做Native电泳的时候这个染液很好用。但是现在做组织提取的蛋白，发现染不上色。最初marker也无条带。后来微波加热了下，发现marker有2个条带，其余不清楚。我的蛋白样品无任何条带。
问：
1。提取的蛋白用考马斯方法测量的出含量。就是说一定有蛋白吧
2。我的上样量为8ul，相当于蛋白每个上样量为50ug左右。是不是少？
3。实验方法存在问题吗
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