Question

动物组织如何提取总RNA？

Answer 1

Trizol法

1、将组织在液氮中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨；每2E6个细胞加入1mLTrizol。注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。

2、研磨液室温放置5min，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，静置5min，12,000rpm离心5min。

3、取上层水相于一新的离心管，按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，剧烈振摇使混匀，4℃，12,000rpm离心10min。

4、弃去上清液，按每1ml Trizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇，涡旋混匀 ，4℃×7,500rpm×5min。

5、重复以上步骤。

6、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10min，加入30μL RNase Free的水中。

7、电泳检测。