胰岛素原转变为胰岛素的过程是在哪里进行的 5
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利用胰岛素RNA与E.coli大量生产胰岛素简述
一. 胰岛素rna的提:1.取材,目前,猪的胰岛素是应用最广泛的胰岛素(与人的胰岛素只相差一个氨基酸),因此可以大量取材于猪的胰脏。2.提取,可以用裂解法提取rna。
二. 胰岛素rna的纯化:对于,大量的rna,利用有机溶剂抽取提法可以提纯,并且利用电泳法检。
三. 植入:提取的rna要与质粒融合导入E.coli中,因此,rna要通过逆转录成dna并且与质粒结合,导入E.coli。1.逆转录,逆转录所需要的原料是四种脱氧核苷酸即为:A,T,C,G。另外,还需要逆转录酶,在模拟环境下进行逆转录。通过逆转录,我们由胰岛素rna获得胰岛素的全部基因。2.质粒融合,先得用同样的限制性核酸内切酶处理质粒,产生和人胰岛素基因片段相同的黏性末端(也可能是平末端),然后将两DNA分子用DNA连接酶结合在一起。关于运载体,首先需要有多处限制酶切点,然后还需要有一段标记基因,最后需要有能在受体细胞内稳定存在、自我复制并表达的能力。大肠杆菌内含质粒(独立于细菌本身的DNA,存在于细胞质内的小型环状DNA分子),且满足以上条件。将组装好的质粒植入E.coli。
四. 复制:进入E.coli的质粒需要经过数次的复制才能在胞体内形成规模的,有效地应用的胞体。因此,我们需要把通过这些种方式获得胞体,经过数次的繁殖,获得需要的胞体。质粒在胞体内的复制是以A,T,C,G为原料,在dna聚合酶,以及dna解旋酶等酶的存在下进行的。dna的复制特点是 a,半保留复制,即母链解旋,并且以每一条子链为模板进行自我复制。b,双向复制,dna复制时,从起点向两个方向解旋形成复制叉,复制叉的两个方向同时复制。c,不连续复制,dna的复制总是沿着5'~3'端复制,因此,在复制叉中,总有一条子链(随从链)在其母链dna解旋到一定程度的时候,再的复制,然后再解旋,再复制,直到复制完毕。E.coli的复制方式还有边解旋边复制的特点。
五. 经过,数次的复制,我们得到了大量,且较纯净的含有猪胰岛素基因的E.coli。下一步就是让基因表达,就能得到大量的胰岛素。1,转录,E.coli的转录的以dna的一条子链为模板转录的。产物链从5'~3'端延续。转录的所需要的原料是核苷酸既:A,C,G,U。所需要的酶为dna解旋酶,rna聚合酶,rna连接酶,还需要启动因子,转录因子,启动因子,ρ因子等。2,翻转录的产物为mRNA,并移动到核糖体上进行翻译,翻译还需要一种rna成为转运rna(tRNA).mRNA与核糖体结合以后,tRNA携带氨基酸与之结合,经过一系列的反应产生肽链,肽链经过加工修饰后变成具有活性的蛋白质,即胰岛素.
经过上述,可实现用胰岛素RNA与E.coli大量生产胰岛素。
一. 胰岛素rna的提:1.取材,目前,猪的胰岛素是应用最广泛的胰岛素(与人的胰岛素只相差一个氨基酸),因此可以大量取材于猪的胰脏。2.提取,可以用裂解法提取rna。
二. 胰岛素rna的纯化:对于,大量的rna,利用有机溶剂抽取提法可以提纯,并且利用电泳法检。
三. 植入:提取的rna要与质粒融合导入E.coli中,因此,rna要通过逆转录成dna并且与质粒结合,导入E.coli。1.逆转录,逆转录所需要的原料是四种脱氧核苷酸即为:A,T,C,G。另外,还需要逆转录酶,在模拟环境下进行逆转录。通过逆转录,我们由胰岛素rna获得胰岛素的全部基因。2.质粒融合,先得用同样的限制性核酸内切酶处理质粒,产生和人胰岛素基因片段相同的黏性末端(也可能是平末端),然后将两DNA分子用DNA连接酶结合在一起。关于运载体,首先需要有多处限制酶切点,然后还需要有一段标记基因,最后需要有能在受体细胞内稳定存在、自我复制并表达的能力。大肠杆菌内含质粒(独立于细菌本身的DNA,存在于细胞质内的小型环状DNA分子),且满足以上条件。将组装好的质粒植入E.coli。
四. 复制:进入E.coli的质粒需要经过数次的复制才能在胞体内形成规模的,有效地应用的胞体。因此,我们需要把通过这些种方式获得胞体,经过数次的繁殖,获得需要的胞体。质粒在胞体内的复制是以A,T,C,G为原料,在dna聚合酶,以及dna解旋酶等酶的存在下进行的。dna的复制特点是 a,半保留复制,即母链解旋,并且以每一条子链为模板进行自我复制。b,双向复制,dna复制时,从起点向两个方向解旋形成复制叉,复制叉的两个方向同时复制。c,不连续复制,dna的复制总是沿着5'~3'端复制,因此,在复制叉中,总有一条子链(随从链)在其母链dna解旋到一定程度的时候,再的复制,然后再解旋,再复制,直到复制完毕。E.coli的复制方式还有边解旋边复制的特点。
五. 经过,数次的复制,我们得到了大量,且较纯净的含有猪胰岛素基因的E.coli。下一步就是让基因表达,就能得到大量的胰岛素。1,转录,E.coli的转录的以dna的一条子链为模板转录的。产物链从5'~3'端延续。转录的所需要的原料是核苷酸既:A,C,G,U。所需要的酶为dna解旋酶,rna聚合酶,rna连接酶,还需要启动因子,转录因子,启动因子,ρ因子等。2,翻转录的产物为mRNA,并移动到核糖体上进行翻译,翻译还需要一种rna成为转运rna(tRNA).mRNA与核糖体结合以后,tRNA携带氨基酸与之结合,经过一系列的反应产生肽链,肽链经过加工修饰后变成具有活性的蛋白质,即胰岛素.
经过上述,可实现用胰岛素RNA与E.coli大量生产胰岛素。
追问
答案是高尔基体中,你没有看清我问的是什么
11
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