将目的基因插入质粒的某基因中这个基因还能否表达?

还有怎么利用这个基因检测目的基因是否导入质粒?... 还有怎么利用这个基因检测目的基因是否导入质粒? 展开
百度网友3fdd3fb28
2012-03-24 · TA获得超过1757个赞
知道小有建树答主
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这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用蓝白斑筛选作为参考。
质粒上包含LacZ的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成有活性的beta半乳糖苷酶,可以分解X-gal成蓝色,这就是蓝色克隆。

当质粒的多克隆位点插入外源序列之后,破坏alpha片段的编码(也有很小几率插入的片段不影响读码框,且编码的融合蛋白仍有alpha片段的活性,这就是假阴性)或者破坏其启动子序列,最终不能形成有活性的beta半乳糖苷酶。这就是白色克隆。

所以回到这个问题,可以认为原本的基因,不能表达或者不能正常表达。

参考资料: http://baike.baidu.com/view/161221.htm

zhzh217
2012-03-26 · 超过42用户采纳过TA的回答
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你说的目的基因的插入应该是用lacZ基因作为检测信号,是用蓝白班筛选的办法
至于你的蛋白是否表达就要用SDS-PAGE和Western blot来检测了
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百度网友22f3490
2012-03-24 · TA获得超过3026个赞
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这个基因是指质粒的某个基因么 那这个基因不会表达了
更多追问追答
追问
那怎么利用这个基因检测目的基因是否导入质粒?如果用“质粒的某个基因”的相应抗生素筛选,那这个受体细胞不就会死了么?
追答
所以说不是插到了这个基因中 是插到了质粒的别的地方 这个基因是抗性基因  通过抗性筛选只能筛出质粒是否转入了受体细胞 需要再菌落PCR和测序才能知道目的基因是否插入了质粒 要做real time和western blot才能知道目的基因是否正常表达了  插入不代表表达
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