Question

简述采用基因工程技术生产胰岛素的操作步骤

Answer 1

1，目的基因的获取：通过各种手段（基因文库，化学合成，PCR技术等）获取胰岛素基因
2，基因表达载体的构建：一般采用质粒，用同一种限制酶切割质粒和切取目的基因（胰岛素基因）使产生相同的粘性末端，将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处，再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒
3，将重组质粒导入受体细胞（如大肠杆菌，用感受态细胞法即Ca+处理）
4，检测与鉴定

Answer 2

基因操作的基本步骤
进行基因操作一般要经历四个基本步骤，也就是基因操作的“四步曲”。
提取目的基因
基因操作的第一步，是取得人们所需要的特定基因，也就是目的基因(如图)。如前
面提到的苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、
种子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等，都是目的基因。
要从浩瀚的“基因海洋”中获得特定的目的基因，犹如大海捞针，是十分不易的。科学家们经过不懈地探索，想出了许多办法，概括地说，主要有两条途径:一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因;另一条是人工合成基因。
直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。这种方法犹如用猎枪发射的散弹打鸟，无论哪一颗弹粒击中目标，都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增)，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得。
用“鸟枪法”获取目的基因的缺点是工作量大，具有一定的盲目胜。又由于真核细胞的基因含有不表达的DNA片段，不能直接用于基因的扩增和表达，因此，在获取真核细胞中的目的基因时，一般是用人工合成基因的方法。
目前人工合成基因的方法主要有两条途径。一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因(如图)。如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。