Question

细胞DNA提取试剂的选择

Answer 1

       从细胞或组织中提取核酸进行分子生物学研究或基因检测已经成为现代医学诊断以及科学研究的一种重要手段。原理不必多说，做过相关实验的小伙伴应该都知道，那就是将细胞膜破裂，变性膜蛋白以及核蛋白，释放出核酸，然后再将核酸提取纯化出来。

       众所周知，细胞、组织DNA提取的主流方法主要有磁珠法和离心柱法。关于这两种方法的优劣想必大家在很多资料中已经有所了解，磁珠法针对大批量样本，可自动化作业，但提取的DNA纯度低，得率也较低，而且容易引发交叉污染，导致假阴性检测结果；离心柱法适合手动提取或半自动化提取，工作效率低一些，但提取的DNA纯度较高，得率也较高。

       如果样本不是太多或者样本比较珍贵，而且实验对DNA提取结果要求比较高，个人建议最好采用离心柱法。那么，面对颂州种类繁多的离心柱法试剂盒，我们应该如何选择？接下来我们就看一下有哪些因素需要考虑。

        一、较高的DNA提取得率。对离心柱法而言，细胞DNA提取得率的高低主要取决于离心柱对核酸的吸附能力、洗脱能力以及裂解液的裂解消化能力。离心柱的硅胶膜DNA吸附性能好、裂解液裂解能力强、洗脱液洗脱能力好，核酸的提取得率就高。反之，DNA的提取得率就不高。我们可以采用紫外分光光度法进行DNA提取得率的测定，但是不能作为判断得率的唯一标准，最好还是要做个PCR或荧光定量。细胞数量与提取的核酸量成正比，如果要提高核酸得率，可通过增加细做樱羡胞量来实现。一般先提取105-106的细胞量（最好不超过107 Cell，可用细胞计数方法进行细胞计数），如结果不理想可考虑增加细胞量。但如果增加细胞量还不能得到满意结果，应及时考虑更换试剂盒。目前国内常用的细胞DNA提取试剂有国外品牌Q，国产品牌Biog和T等。根据我们的经验，Q细胞DNA的提取得率，一般107细胞样本在40-60ug。Biog与Q公司的DNA提取得率相近，106-107细胞样本在30-60ug；T公司 106-107细胞样本DNA得率在20-50ug，都能满足下游PCR实验的要求。

       二、DNA提取纯度高。我们一般采用紫外分光光度法测定OD260/OD280比值来估计核酸纯度。一般DNA 溶液OD260/OD280比值应在1.6--1.8之间，如果提取的DNA溶液该比值小于1.6，通常说明有蛋白质或酚、多糖等的污染。如果提取的DNA溶液该比值大于1.9，则表明有RNA污染。不同品牌的试剂盒提取的DNA纯度略有差别，国产试剂盒Biog和T的DNA提取纯度差不多，都可以直接应用于基因检测、PCR、qPCR、分子杂交等。Q的纯度略高，一般在1.7-1.9，除了以上应用，还可用于对纯度要求略高的实验，如二代测序等。

        三、产品价格。市面上的试剂盒价格参差不齐，各个实验室的经费情况也不尽相同，所以价格也是客户选购产品的重要因素。对于绝大多数实验如PCR、qPCR、基因检测、分子杂交等，国产试剂盒都能满足质量要求。与国外知名品牌相比，国产试剂盒的价格较为便宜，一般只有国外品牌价格的30%，性价比较高。因而，对于以上实验建议选用Biog、T等国产试剂盒。对于经费不多的课题研究或样本量较大的纯拍临床检测项目，建议选用国产试剂盒。对提取DNA的纯度要求相对较高的研究如直接测序，细胞转染等，则可考虑Q等国外知名品牌。

        综上三点，与国外知名品牌相比，国产试剂盒在细胞DNA提取纯度上略有不足，但不影响大多数实验，特别是下游PCR扩增以及分子杂交类实验；在DNA提取得率上，国内试剂盒与国外品牌差别不大；而在价格方面，国产试剂盒具有比较明显的优势。如果经费充足，DNA纯度要求较高，可考虑选择Qiagen等国外知名品牌。如果经费不多或下游做PCR、qPCR、分子杂交等实验，可考虑选择性价比较高的Biog等国产品牌。