DNA提取的步骤及原理
展开全部
酚-氯仿法提取人外周血基因组DNA的基本原理是什么？
答：蛋白质对DNA制品的污染常常影响到以后的DNA操作过程，因此需要把蛋白质除去。一般采用苯酚/氯仿抽提的方法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，而对DNA无影响。经苯酚/氯仿抽提后，蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面，DNA则留在水相。
取ACD抗凝血2~3ml，置于15ml的离心管内----加灭菌生理盐水至10ml，颠倒混匀，3000rpm，离心10min-----弃上清，重复步骤2两至三次，直至上清呈无色或微红色----加压积红细胞5.5倍的溶血试剂，混匀，放置-20℃冷溶10min后移至4℃，30min，直至溶液由红色悬液变成红棕色清亮溶液-----3000rpm，离心15min，倒扣离心管于滤纸，使管壁液体流尽-----依次加入STE 450 ml，用枪头吹打混匀后，加入蛋白酶K至终浓度100mg/ml，然后加入10% SDS 25 ml，混匀后移至1.5ml EP管，放置于37℃水浴过夜或56℃，3h----加入等体积饱和酚（约500ml），漩涡振荡器上混匀至溶液呈乳滴状，13000rpm，离心5min。------取上清，加入500μl酚/氯仿（等体积配制混合液），漩涡振荡混匀，13000rpm，离心10min。---------取上清，加入500μl氯仿/异戊醇（24：1混合），漩涡振荡混匀，13000rpm，离心10min。-------取上清，加入50μl物NaAc（1/10体积），混匀后再加入1ml 冰冻的无水乙醇，颠倒轻摇，即可见絮状的DNA沉淀，13000rpm，离心10~20秒，得到DNA沉淀。------------DNA沉淀用70%乙醇洗2~3遍。--------待乙醇挥发后，DNA沉淀用100μl TE缓冲液溶解，核酸蛋白测定仪分析DNA浓度和纯度，-20℃保存备用。
答：蛋白质对DNA制品的污染常常影响到以后的DNA操作过程，因此需要把蛋白质除去。一般采用苯酚/氯仿抽提的方法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，而对DNA无影响。经苯酚/氯仿抽提后，蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面，DNA则留在水相。
取ACD抗凝血2~3ml，置于15ml的离心管内----加灭菌生理盐水至10ml，颠倒混匀，3000rpm，离心10min-----弃上清，重复步骤2两至三次，直至上清呈无色或微红色----加压积红细胞5.5倍的溶血试剂，混匀，放置-20℃冷溶10min后移至4℃，30min，直至溶液由红色悬液变成红棕色清亮溶液-----3000rpm，离心15min，倒扣离心管于滤纸，使管壁液体流尽-----依次加入STE 450 ml，用枪头吹打混匀后，加入蛋白酶K至终浓度100mg/ml，然后加入10% SDS 25 ml，混匀后移至1.5ml EP管，放置于37℃水浴过夜或56℃，3h----加入等体积饱和酚（约500ml），漩涡振荡器上混匀至溶液呈乳滴状，13000rpm，离心5min。------取上清，加入500μl酚/氯仿（等体积配制混合液），漩涡振荡混匀，13000rpm，离心10min。---------取上清，加入500μl氯仿/异戊醇（24：1混合），漩涡振荡混匀，13000rpm，离心10min。-------取上清，加入50μl物NaAc（1/10体积），混匀后再加入1ml 冰冻的无水乙醇，颠倒轻摇，即可见絮状的DNA沉淀，13000rpm，离心10~20秒，得到DNA沉淀。------------DNA沉淀用70%乙醇洗2~3遍。--------待乙醇挥发后，DNA沉淀用100μl TE缓冲液溶解，核酸蛋白测定仪分析DNA浓度和纯度，-20℃保存备用。
已赞过
已踩过<
评论
收起
你对这个回答的评价是？
研载生物科技（上海）有限公司_
2023-04-12 广告
DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。 ②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。 ③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。 ④过滤 在漏斗中垫上尼...
点击进入详情页
本回答由研载生物科技（上海）有限公司_提供
展开全部
方法很多，你想问什么，楼上已经给你列出了经典的教科书的方法
已赞过
已踩过<
评论
收起
你对这个回答的评价是？
推荐律师服务：
若未解决您的问题，请您详细描述您的问题，通过百度律临进行免费专业咨询
