Question

何为米氏常数，影响其测定的因素有哪些

Answer 1

米氏方程表示一个酶促反应的起始速度与底物浓度关系的速度方程Km的意义及应用（1）、活性中心被底物占据一半时的底物浓度。当V=1/2Vmax时，Km=[S]。（2）、Km是特征常数，一般只与酶的性质、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。（3）、Km可近似表示表示酶与底物的亲和力Km=(K2+K3)/K1=Ks+K3/K1当K1、K2>>K3时，Km近似等于Ks，因此，1/Km可近似表示酶与底物的亲和力大小（4）、Km与天然底物Km最小或最高Vm/Km比值的底物称之为该酶的最适底物或天然底物。（5）、已知Km，可根据[S]推算V，或由V推算[S]（6）、了解酶的Km及[S]推知是否受[S]调节（7）、用于鉴别原级同工酶、次级同工酶。（8）、测定不同抑制剂对某个酶的Km值的影响判断抑制类型（非竞争性抑制剂米氏常数不变，最大反应速度减小；竞争性抑制剂米氏常数增大，最大反应速度不变。）（9）、催化可逆反应的酶：测定Km和[S]推测催化反应的方向及程度。测定Km一般用作图法求得。作图法有很多，最常用的是Linewaver-Burk作图法，该法是根据米氏方程的倒数形式，以1/v对1/[S]作图，可得到一条直线。直线在横轴上的截距为 -1/Km可求出Km

它的数值等于酶促反应达到其最大速度Vm一半时的底物浓度〔S〕

Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=Vm/2时，【S】=Km,单位为mol/l。Km是酶极为重要的动力学参数，其物理含义是指ES复合物的消失速度常数（k-1+k2）与形成速度常数（k1）之比。当PH、温度、离子强度不变时，Km是恒定的。

米氏常数
图示以及公式推导。 它可以表示酶和底物之间的亲和能力，Km值越大，亲和能力越弱，反之亦然。 它可以确定一条代谢途径中的限速步骤：代谢途径是指由一系列彼此密切相关的生化反应组成的代谢过程，前面一步反应的产物正好是后面一步反应的底物，例如，EMP途径。限速步骤就是一条代谢途径中反应最慢的那一步，Km值最大的那一步反应就是，该酶也叫这条途径的关键酶。 它可以用来判断酶的最适底物，某些酶可以催化几种不同的生化反应，叫多功能酶，其中Km值最小的那个反应的底物就是酶的最适底物。 Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关而与酶的浓度无关，与底物的浓度也无关，这一点与Vm是不同的，因此，我们可以通过Km值来鉴别酶的种类。但是它会随着反应条件（T、PH）的改变而改变。非竞争性抑制剂米氏常数不变，最大反应速度减小；反竞争性抑制剂米氏常数减小，最大反应速度减小
Km的意义及应用
（1）、活性中心被底物占据一半时的底物浓度。当V=1/2Vmax时，Km=[S]。
（2）、Km是特征常数，一般只与酶的性质、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。
（3）、Km可近似表示表示酶与底物的亲和力
Km=(K2+K3)/K1=Ks+K3/K1
当K1、K2>>K3时，Km近似等于Ks，因此，1/Km可近似表示酶与底物的亲和力大小
（4）、Km与天然底物
Km最小或最高Vm/Km比值的底物称之为该酶的最适底物或天然底物。
（5）、已知Km，可根据[S]推算V，或由V推算[S]
（6）、了解酶的Km及[S]推知是否受[S]调节
（7）、用于鉴别原级同工酶、次级同工酶。
（8）、测定不同抑制剂对某个酶的Km值的影响判断抑制类型（非竞争性抑制剂米氏常数不变，最大反应速度减小；竞争性抑制剂米氏常数增大，最大反应速度不变。）
（9）、催化可逆反应的酶：测定Km和[S]推测催化反应的方向及程度。