有一个最基本的PCR问题没有明白，引物到底是如何和模板链结合的
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一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补。
引物为人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。
PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。
扩展资料：
PCR扩增的作用机制：
1、在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，快速升温至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。
2、93℃～94℃1min足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。
3、变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。
参考资料来源：百度百科-引物
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11
2024-08-28 广告
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp； 2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近； 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55...
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