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2013-04-21
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◆Real-time PCR技术的原理就是用一种标准对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量。
◆这种标准对照就是参照物,在定量PCR中,用它来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样品定量的标准,同时通过竞争性作用校正扩增系统内管间的扩增效率,使其具有可比性。参照物按其性质不同可分为内参照和外参照。内参照是与目的基因加于同一反应管中,与目的基因同时进行扩增,以反映体系中可能出现的PCR影响因素,此即所谓的竞争性PCR;而外参照则是参照物与目的基因的扩增分别在不同的管间进行,此即所谓的非竞争性PCR。
◆搞清了内参和外参的概念,你的问题也就很容易解答了:由于你实验中GAPDH和目的基因反应体系是在不同的EP管中进行,所以它应属于外参照。
◆这种标准对照就是参照物,在定量PCR中,用它来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样品定量的标准,同时通过竞争性作用校正扩增系统内管间的扩增效率,使其具有可比性。参照物按其性质不同可分为内参照和外参照。内参照是与目的基因加于同一反应管中,与目的基因同时进行扩增,以反映体系中可能出现的PCR影响因素,此即所谓的竞争性PCR;而外参照则是参照物与目的基因的扩增分别在不同的管间进行,此即所谓的非竞争性PCR。
◆搞清了内参和外参的概念,你的问题也就很容易解答了:由于你实验中GAPDH和目的基因反应体系是在不同的EP管中进行,所以它应属于外参照。
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