Question

谁能出一个关于蛋白质的问题给我

最好也把答案写上

Answer 1

1怎么从进化的角度看待蛋白质结构与功能间的关系?/??
2蛋白质一级结构测定的基本策略和步骤??回答第二个问题。
一级结构测定，可以从N末端测序，或C末端测序。C末端测序可用化学法或质谱法，化学法成功率不高，且很昂贵，测得序列较短（小于10个），并有可能不准确。质谱法采用羧肽酶把氨基酸从羧端降解下来用质谱鉴定剩余肽端分子量，再计算出切下来的是什么氨基酸，但该方法也有缺陷，比如亮氨酸跟异亮氨酸，赖氨酸跟谷胺酰胺分不开，羧肽酶酶解效率跟样品情况有关等。
对已知蛋白就简单得多，只要做个肽指纹图谱就可以了。
N端测序比较准确，可以最多测到50个氨基酸，只要把你样品交给蛋白测序公司就可以了，比如上海基康公司。
策略：
蛋白质N末端测序采用Edman降解法：在碱性条件下蛋白质的自由α-氨基与PITC（Phenylthiohydantoin）偶联后，与之毗邻的第二残基的肽键大为削弱，在无水三氟乙酸（Trifluoroacetic acid, TFA）的作用下发生特异性断裂，生成ATZ氨基酸，毗邻的第二个残基的α-氨基再与PITC反应，如此循环往复地进行偶联→降解→偶联→降解反应。ATZ氨基酸在转化器内异构化为更稳定的PTH氨基酸，经HPLC在线检测，结合标准品的洗脱曲线判定氨基酸的种类。释放的PTH氨基酸由HPLC在线定量检测(269nm)。可以测定50~60个氨基酸残基。
主要反应步骤如下：
偶联：
1） 碱液的输送：以液态形式输送N-甲基哌啶水/甲醇溶液（R2）；
2） 输送可完全湿润样品过滤器的5% PITC正庚烷溶液（R1），然后短暂干燥；
3） 重复碱液输送；
4） 45℃~48℃条件下延迟反应时间；
5） 惰性气体流干燥试剂；
6） 正庚烷（S1）和乙酸乙酯（S2）重复洗涤，导入废物容器；
7） 干燥，此后衍生化的蛋白质即PTC肽可以进行裂解。
裂解：
1） 输送无水TFA（R3）
2） 在45℃~48℃条件下反应3分钟（延迟时间）；
3） 惰性气体流干燥以除去酸；
4） 输送丁基氯（S3），溶解释放的ATZ氨基酸；
5） ATZ氨基酸/丁基氯溶液输送入转化器；
6） 重复丁基氯抽提，收集至转化器。
转化：
1） 输送25%~40% TFA水溶液（转化介质，R4）至转化器；
2） 在45℃~50℃条件下转化10~20分钟（包括液体干燥）；
3） PTH氨基酸溶解于合适的溶剂混合物（S4）（如20%乙腈水溶液或不含乙酸钠添加剂以调节PH值），这样可直接注入在线HPLC系统的分析柱；用溶剂X1（甲醇）或S5（乙腈）洗涤转化器，导入废物器
3.3仪器设备
ABI 492cLC蛋白质N-末端测序系统:
主要由四部分组成：PROCISETM反应器492、泵140D、U检测器和微机。
3.4材料与试剂
材料
Prosorb filters,Prosorb Insert,Procise Cartridge Seals,
主要反应试剂
—R1：5%PITC的庚烷溶液 40mL
—R2：N-甲基哌啶水/甲醇 100mL
—R3：无水三氟乙酸TFA 40mL
—R4：25%TFA，0.01%的DDT 40 mL
—R5：PTH氨基酸标准混合物乙腈 和0.001%的DDT 10 mL
—S1：S3，1-氯丁烷（丁基烷）200 mL
—S2：乙酸乙酯 450 mL
—S3：1-氯丁烷（丁基烷）200 mL
—S4：10%的乙腈 200 mL
—X1：甲醇 40 mL
—X2：乙腈 40 mL
—X3： n-正庚烷 200 mL
—A3：3.5%THF,，加9~11 mL的Premix 和600 μl乙腈、45μl TFA和100 μM NaH2PO4 450 mL
—B2：乙腈/丙烷 450 mL

Answer 2

大多数蛋白质是以何种形态进入细胞的？
是以液态形式通过吞饮进入细胞