Question

β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数，是啥意思？

Answer 1

描述有问题。抗体检测的是抗原，所以你检测的是β-Actin
做western很重要的一点就是要有一个参照，比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达，甚至它的变化（比如对某个细胞因子的反应），这时β-Actin起到几个作用：
1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到，那么你的体系有问题，因为β-Actin是看家基因编码的，理论上是100％检测到的；
2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到，说明目的蛋白没有表达或者量很低；
3、作为看家基因，β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响，是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后，目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化，这时β-Actin还起到一个半定量的作用。
所谓内参就是内部参照的意思。
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Western的抗体通常分为一抗和二抗，一抗结合目的蛋白，这是Western变化最多的地方；二抗则比较通用，商品很成熟，二抗带有荧光或者酶标记，它是结合一抗的，但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。Western很少有直接标记的方法。