Question

简述DNA和RNA连接酶的催化反应机制。

Answer 1

【答案】：所有已发现的DNA连接酶以及RNA连接酶在作用过程中都形成两种以共价键相接的中间产物，即①酶与AMP的络合物(E-A)；②底物与AMP的络合物(DNA-A)。催化反应分三步进行：
(1)酶-核苷酸中间产物的形成：将NAD或ATP的腺苷酰基团转到连接酶的赖氨酸残基的ε-NH₂上形成酶一核苷酸中间产物。如果辅助因子是NAD⁺，另一个产物就是NMN，若是用ATP作为辅助因子，另一个产物就是PPi。
(2)腺苷酰基团被转移到DNA末端的5'-P，将DNA缺口的5'端激活。
(3)DNA缺口的3'-OH同激活的5'-P形成磷酸二酯键，释放出AMP。