Question

高效液相基线不稳的原因，在线求解

我做双酚A的标准曲线，用双酚A溶于甲醇做成0.02mg/l和0.01mg/l的样品，C18柱，流动相甲醇：水=70:30，流速试过1，0.5，0.3,，0.25，之前走基线都很稳，可是测样的时候基线极度不稳定，而且似乎 峰无法完全分离，请问这是什么原因？另外，双酚A究竟有几个峰，C18柱过短会不会影响峰的分离（我用的柱子是买机器送的，不到10cm）附几张最近做出来的图，求大家帮帮忙解答啊啊

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Answer 1

几种可能性：

1. 你的水相和有机相是怎么混合的？不要用在线排气，人为混合，然后减压抽滤之后再试一试。

2. 这根柱子的粒径是多少。长度是10cm，那么粒径呢？是5um？还是3.5um或是更小？粒径很小的柱子就不能开太大流速。柱压高不说，也没有必要。

3. 甲醇是不是干净？你的波长太低了。190nm的波长，甲醇已经有吸收了。这样对要不你就用乙腈进行试验，要不你就用好一点的甲醇。比如Fisher或者默克的色谱级甲醇再试一下。

追问

甲醇和水是实验室固定用的，其他人也是用的这个，流速0.25别人说已经很低了....然后波长我调的是280 278这样子的？是哪边有问题，我一直找不到，而且我的基线一直不稳该怎么办

追答

这个关于流速的问题吧，流速低不低和你的柱子粒径有直接关系。一般的柱子5um粒径，1.0的流速比较正常。可是，可是你的柱子是安捷伦送的。
我不知道你们的仪器型号是多少。以前我们购买1260时送的柱子，粒径很小，流速就没超过0.5.ml/min。实验的变化性很大。不要横向对比，完全没有可比性。

关于水和甲醇的问题也是一样。实验室都用这个，不代表就肯定能行。安捷伦虽然有在线脱气装置，不过为了排除可能性，先手动混合一次流动相试试。

而且，你需要看一下你的氘灯用了多长时间。在安捷伦的视图界面，鼠标移动到氘灯未知就可以看到了。如果用的时间太长也会出现这种问题。

试验出现问题，只能一个一个排查。这个没有别的办法。先不要着急。如果手动混合流动相没有用，那就换一根C18柱子。如果还不行就换仪器。思路就是这样。

追问

手动混合流动相该怎么弄？我在这方面是新手，可以具体说下吗？因为还有一组做液相实验的，她们跟我只是流动相不同，甲醇和无机盐嘛，她们的图很漂亮，但是我不懂我的图究竟问题出在哪？走基线很稳一测就有问题，还是我的溶液有问题？？双酚A该出几个峰呢？

追答

这个没有关系，你不用管他们。加了缓冲盐之后的体系和你不一样。
双酚a我没有做过，具体不清楚。不过应该是一个主峰，和几个杂质峰。
这个品种你们是第一次做吗？如果之前有人检验过，你起码可以看一下出峰情况。和公司或是工厂里的老员工咨询一下。

手动混合流动相就是说，你现在是一瓶水、一瓶甲醇，在工作站上设置甲醇：水=70:30的比例吗？
如果是，就改成用量筒，取700ml甲醇+300ml水，用减压抽滤过滤之后再看看基线。这是一。

你把你现在这根柱子上写的所有的信息，还有说明书上的信息给我打出来。或者你让懂的人帮你看一下柱子的型号，不是填料。是Xum，4.6*100mm之类的型号。这是二。
样品也要过滤，用注射器加上过滤头过滤。有些样品是粗品，或者有一些有机溶剂在里面，特别脏，也可能影响你的体系。这是三。

柱压看一下。现在的柱压有多少？或者安捷伦在线柱压的视图。看看柱压波动情况。柱压不稳也可能导致基线波动。这是四。

追问

我的C18柱是4.6*100mm，3.5um的