Question

如何判断提取质粒DNA的纯度

Answer 1

可以通过紫外吸收检测。

因为核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值，估计核酸的纯度。

纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。

270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。

扩展资料：

在判断过程中，也有可能出现质粒DNA提取纯度失败的情况，具体可能是有以下几个原因：

1、菌体量可能过大,裂解不充分,或裂解液与中和液比例不适当；

2、混合时过于剧烈,可能会带来基因组DNA片段的污染；

3、Rnase失活,可能带来RNA污染；

4、离心不充分（有絮状物在上层）,或在离心后吸取上清时,将沉淀吸入,会带来蛋白质污染.

参考资料来源：百度百科——质粒DNA纯化

Answer 2

1、用紫外分光光度计测浓度和纯度 2、跑电泳看条带

Answer 3

大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。区别：
1.大提用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以大提的产物比小提的量多很多，而且纯度很高。
3.小提一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验，大提用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。