大家的PCR一般都跑多少个循环啊
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2017-01-20 · 专注各类elisa试剂盒、血清抗体
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我觉得国外杂志上说要跑50个循环是有可能的。但我们一般也就25－35个循环，我们实验室有人跑过40个循环的，但是那种是所谓touch down 的方法。具体要跑多少个循环，我认为有以下几个因素可以决定：
最关键的是引物设计的优劣，这几乎直接决定了实验的结果；其次是要扩增的PCR产物的长度和GC含量了，长度越长，当然圈数要相应增加了，GC含量高些，相应就难扩一点；还有就是TAQ酶量和引物浓度了，浓度大些，相应的圈数可能就要少些，但我试过，浓度过大会抑制反应；此外我觉得模板的种类和质量还有一定关系，不同物种因为GC含量有所区别所以扩增效率也会有所差别。最后，我最喜欢用PE9600了，我几乎从未在它上面失过手，比PRE9700还好用，真不愧为"PCR至尊“
最关键的是引物设计的优劣，这几乎直接决定了实验的结果；其次是要扩增的PCR产物的长度和GC含量了，长度越长，当然圈数要相应增加了，GC含量高些，相应就难扩一点；还有就是TAQ酶量和引物浓度了，浓度大些，相应的圈数可能就要少些，但我试过，浓度过大会抑制反应；此外我觉得模板的种类和质量还有一定关系，不同物种因为GC含量有所区别所以扩增效率也会有所差别。最后，我最喜欢用PE9600了，我几乎从未在它上面失过手，比PRE9700还好用，真不愧为"PCR至尊“
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