Question

简述质粒DNA提取方法中吸附、漂洗、洗脱+等步骤的原理。

Answer 1

问：简述质粒DNA提取方法中吸附、漂洗、洗脱+等步骤的原理。

答：亲，你好，质粒DNA提取方法中吸附、漂洗、洗脱+等步骤的原理：不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB 或2×YT，菌液体积必须减少；若质粒或宿主菌是非常高的拷贝数或生长率，则需调整LB培养液体积‘ 质粒未全部溶解尤其质粒较大时，洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间

答：漂洗液洗涤后应离心尽量去除 乙醇残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，再加入洗脱缓冲液。洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到zui大洗脱效率。DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如洗脱缓冲液EB (10 mM Tris?Cl, pH 8.5)或水。洗脱效率取决于pH值。zui大洗脱效率在pH7.0-8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。

答：洗脱体积对回收率有一定影响。随着洗脱体积的增大回收率增高，但产品浓度降低。为了得到较高的回收率可以增大洗脱体积。洗脱时间对回收率也会有一定影响。洗脱时放置一分钟可达到较好的效果。