Question

在浓盐提取rna中什么是抽提保温的

Answer 1

问：在浓盐提取rna中什么是抽提保温的

答：将器皿浸泡于0.1% DEPC溶液中12小时，70-80℃烘烤干燥，103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，再70-80℃烘烤干燥即可使用

答：将超低温保存的组织材料除去样品袋, 放在2层乳胶手套中，迅速用锤子敲成碎块，称重。称取一定量的组织在干烤过的陶瓷碾钵中用杵子不断碾磨组织，期间用液氮始终使组织保持冻结。将组织彻底碾碎，直至成粉末状。将粉末转入冰预冷的匀浆器中，加入溶液D（每克组织加10ml溶液D，以下均以每克组织计），匀浆至透清。

答：将匀浆液均匀分装入用冰预冷的50 ml离心管中，向每管组织匀浆液中顺序加入：1ml 2 mol/L NaAc(pH 4.0)，10 ml水饱和酚，2ml氯仿-异戊醇（49:1），充分混匀后用力震荡离心管10 s(溶液充分乳化，成乳白状，无分相现象)，冰浴15 min

答：对组织匀浆液进行4℃、10,000×g、20min离心，小心吸取上清，吸的时候注意不要吸动界面的DNA和蛋白，加入等体积预冷至-20℃的异丙醇,混匀后-20℃放置1小时；

答：4℃、14,0005g、20 min离心，弃上清，短暂离心，吸干所有上清；将沉淀溶于2ml溶液D中，用等体积的酚-氯仿、氯仿-异戊醇（49:1）各抽提一遍。

问：我想问的是浓盐法提取RNA

答：浓盐法提取rna，他的原因是：浓盐法改变细胞膜的通透性。

答：浓盐法提取RNA是用10%NaCl溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。实验中主要是将pH调到2.0～2.5，在等电点附近要求要在7.0。

答：DNA携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息，生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。

问：在浓盐提取RNA的过程中为什么要先把pH调到4.2再调到2.0～2.5

答：主要是为了控制时间，控制温度

问：这是pH跟时间温度有什么关系呢

答：控制时间、温度主要是对付内源和外源RNA酶对RNA的降解作用。RNA酶的活性温度越适宜，RNA酶和RNA接触时间越长肯定RNA降解的越厉害。

答：PH值跟RNA提取的纯度有关，RNA溶解的PH值和其他杂质如DNA，蛋白，多酚之类的东东不一样。PH值区分越精确，其他杂质混进来的肯能性越小。

问：那为什么要有pH4.2呢，直接用等电点pH2.0～2.5溶解度最小的不就行了

答：嗯是的亲亲

问：可是我查阅到的论文需要先调节到pH4.2

问：我想知道原因

答：为你查询一下亲

答：粗盐提纯时，通常会使用过量的NaOH除去样品中的Mg^2+、使用过量的Na2CO3除去样品中的Ca^2+和Ba^2+，用盐酸二次调节滤液的酸度时,把ph值调至4左右，就是为了除去过量的NaOH和过量的Na2CO3，用盐酸除去过量的NaOH时，把ph值调至7即可，用盐酸除去过量的Na2CO3时，反应为：Na2CO3+2HCl=2NaCl+H2CO3 H2CO3=H2O+CO2(气体符号)

答：原理应该跟这个差不多的

答：饱和碳酸溶液的PH约为5.6，把ph值调至4左右就可使碳酸分解完全，促使上述两个反应的发生过量的盐酸在蒸发过程中可以除去总之是为了提高产量