Question

氨基酸总量甲醛法测定存在的问题及对策

Answer 1

问：氨基酸总量甲醛法测定存在的问题及对策

答：亲你好，非常高兴为你解答，氨基酸是两性电解质，不能直接通过酸碱滴定来计算其含量。但在常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此，可用酚酞做指示剂，用标准碱进行滴定。 取3个25ml的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2ml0.1M的标准甘氨酸溶液和5ml水混匀。向3号瓶内加7ml水。然后向3个瓶中各加5滴酚酞指示剂，混匀后各加2ml甲醛溶液，再混匀，分别用0.1M标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率=实际测得值/加入理论量×100

问：氨基酸总量甲醛法测定实验分析

答：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基，而-COOH基显示酸性，又含有-NH2，-NH2则显示碱性。由于-COOH基和-NH2的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。反应式以三种形式存在。用碱完全中和-COOH基时的pH值为8.4~9.2。 2. 试剂： （1）40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，将甲醛用1N NaOH溶液中和（淡兰色）。 （2）0.1%百里酚酞乙醇溶液。 （3）0.100N NaOH标准溶液。 3. 操作步骤： 称约含20mg左右的氨基酸→于烧杯中（如为固体样加水50ml）→加两滴指示剂→用0.1N NaOH溶液滴定到淡兰色→加中性甲醛20ml→摇匀→静置1分钟→此时兰色应消失→再用0.1N NaOH溶液滴定淡兰色，记录两次滴定所消耗的碱液毫升数。