Question

DNA的精提取

Answer 1

问：DNA的精提取

答：亲，你好！DNA的精提取实验构成

答：1.冰冻精液融化后立即置4°℃离心去精清（3500r/min，5min）。精子细胞用SWB(10 nmol Tris-HCI,10 mmol EDTA,1mol NaCI,pH 7.0)-0.5ml 连续洗3次,然后依次按下列步骤提取精子DNA.工2.首先用0.04mol/L二硫苏糖醇(DTT)-250ul,10mg/ml 蛋白酶K-10ul,0.9%十二烷基硫酸钠（SDS）-250ul裂解精子细胞并消化核蛋白，55C消化1-3h（2h）.3.将消化产物加入等体积饱和歌约0.5ml）轻轻充分混匀后8000转离心10min，取上清液转入另一1.5ml离心管。（若离心后两相间有白色物质，重复该步）。4.加入等体积氯仿与异戊醇混合液约0.5ml（氯仿：异戊醇=24：1），轻轻充分混匀，8000转离心10min，取上清转入1.5ml离心管中。

答：5.加入10%体积的3Mol/L的NaAC（100pl），再加入等体积（加入NaAC后的总体积）的异丙醇（保持在室温），轻颠倒混匀，可见白色絮状DNA沉淀物。

答：6.室温下放置1小时，使DNA充分沉淀。12000转离心5分钟，弃上清，可见DNA呈白色小斑附于管底。工7.在沉淀中加入75%乙醇约0.5ml洗涤，12000转离心2min（充分洗涤沉淀并溶解共沉淀下来的离子，沉淀洗下集中至管底），弃上清（注意勿将沉淀滑出）。8.在沉淀中加入无水乙醇约0.5ml，5000转离心5min，弃上清。9.空气干燥30分钟（时间不宜过长），使乙醇充分挥发至DNA透明。10.干燥后产物加入TE缓冲液20ul溶解（轻颠倒，使整个管壁上的DNA都能被TE溶解。（使用的时候取10ul稀释到100ul）

答：酚抽提法: 先用蛋白酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯仿抽提,最后乙醇沉淀

问：提取细菌DNA方法和以上是不是有些不同？

答：对的

答：细菌和精子不是一种类别