Question

pcr中引物连接方向？是图中这样吗？（红色的引物）从引物的3到5？dna的5到3？

Answer 1

问：pcr中引物连接方向？是图中这样吗？（红色的引物）从引物的3到5？dna的5到3？

答：1，pcr引物是利用碱基互补原则，通过找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列。2，首先要找到你用来设计引物的目的基因全序列，一般ncbi、genebank上都能找得到。3，引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导 致其延伸温度大于74℃，不适于taq dna聚合酶进行反应；引物3’端尽量不要出现3个以上的连续碱基，如ggg或ccc，这样会会增加错配几率，3’端尽量不要以a为结尾； 引物序列的gc含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的 gc含量不能相差太大； δg值是指dna双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳 定性。应当选用3’端δg值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间δg值相对较高的引物。引物的3’端的δg值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发dna聚合反应；对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入pcr产物 的载体的相应序列而确定。