基因原核表达诱导纯化蛋白包含哪些步骤呀?原理是什么？
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E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。
咨询记录 · 回答于2021-10-25
基因原核表达诱导纯化蛋白包含哪些步骤呀?原理是什么？
E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。
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不是这个吧 想要问的是基因的原核表达原理及步骤
稍等一下
原核表达是指通过基因克隆技术，将外源目的基因克隆到原核质粒并导入表达宿主菌进行诱导表达的过程。在原核蛋白表达体系中，最常用的就是大肠杆菌表达系统，外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达，常用诱导剂 IPTG，乳糖等诱导方式，其中IPTG是最常用的诱导方式
还有原核表达包含哪些步骤呢 如何诱导纯化蛋白原理和需要的工作
原核表达先要将基因克隆到原核表达载体上，然后通过转化到JM109或BL21等菌株中，诱导表达蛋白，然后进行蛋白纯化
纯化目的蛋白（整个过程要尽量保持在4℃进行）1. 大量诱导目的蛋白（一般需要2-4 L的菌量），用超声波破碎细胞，收集上清。2. GST纯化柱的柱床保存在20%的乙醇中，使用之前，先用吸管将柱床轻轻加入到柱子中，打开柱子，流出乙醇，使柱床沉积下来。3. 加入10ml PBS buffer,洗柱床3遍，使得柱床重新平衡。4. 将准备好的样品加入到柱子中，每次加入5-10ml样品，使样品结合在柱子上（每次上样量不能太多，因为柱子的结合能力有限）。5. 用PBS buffer洗柱子3遍，每次用10ml，去除柱子中非特异性结合的杂蛋白。6. 加入5ml洗脱液（10m mol/l的还原型谷胱甘肽，用50mmol/ltris-bufferr或者PBS buffer溶解）将目的蛋白洗脱出来。用1.5ml离心管收集流出来的样品，每管接0.5ml样，一共收集6-8管(一般情况，第一管流出的是PBS，第二和第三管大部分是目的蛋白，所以OD值很大，第三至第六管的OD值慢慢降低。不要偷懒一次接太多，不然会影响后续收集蛋白。还原型谷胱甘肽很容易被氧化，如果一次没有用完，请用保鲜膜封口置于4度冰箱保存，超过2天的话请更换新的洗脱液。)7. 用PBS buffer洗柱子1遍。8. 用分光光度计测每一管的OD值，记录下读数，将读数大于200的样品留下(一般是第2至第4管)，冻于-20℃冰箱中。9. 重复步骤4-8，直至所有样品均纯化完毕。10.可以用SDS-PAGE检测纯化出来的样品浓度以及纯度
请问进行原核表达的试验也是包括提前基因组DNA、总RNA、转录RNA和PCR 、PCR扩增吗
对的
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