Question

分离真核细胞各种细胞器的常用方法

Answer 1

问：分离真核细胞各种细胞器的常用方法

问：抱歉我不太理解，可否详细说一下呢？

答：细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到： （一）差速离心（differential centrifugation） 在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。 在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。 由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。 差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 （二）密度梯度离心（density gradient centrifugation） 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。 密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。 分离活细胞的介质要求： 1. 能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； 2. PH中性或易调为中性； 3. 浓度大时渗透压不大； 4. 对细胞无毒。