Question

用丙酮沉淀的蛋白为什么在sample buffer里溶解得不完全?

我用trypsin 和trypsin inhibitor，PMSF处理过病毒。然后加预冷的丙酮4：1，丙酮浓度为80%。然后放在零下20度沉淀一小时，15000g离心十分钟，弃上清。 pellet在室温干半小时。然后加3x western blot sample buffer，votex以后有的试管里的蛋白都溶了，有的还能看到没溶的。加水稀释成1xsample buffer以后，在-20度放过夜，第二天95度5分钟以后不溶的仍然不溶。我重复了很多次，每次都有一两个试管不溶，而且不是固定的一个。

每次离心完以后，有的试管里的pellet聚在试管底，有的贴在壁上一片，我觉得聚在试管底的pellet在sample buffer里溶得比较好。贴在壁上一片的就不好溶。我想过是不是因为sample buffer不够，不过有两个试管里的cell lysate 5ul都溶得挺好，就是2ul病毒试管里的蛋白溶得不好，都是加的7ul 3xsample buffer，然后加14ul水。

请教可能的原因有哪些？谢谢！
离心的数据来自实验室的protocol

Answer 1

离心的数据哪来的？