Question

全血 RNA 提取步骤

Answer 1

BIOG产品特点

◎操作简便快速，可在半小时内完成血液 RNA 提取；

◎最大限度地去除了血红素、细胞碎片等杂质污染，提取的

RNA 纯度高，A260/A280 为 1.8-2.0；

◎RNA 提取得率高，可在 2mL 的全血中提取 50μg 以上基

因组 RNA；

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。

操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、无 RNA 酶的 15mL 离心管。

2. 取出洗涤液，按以下操作：

洗涤液：10mL 加入 24mL 无水乙醇，混匀；20mL 加入 48mL 无水乙醇，混匀。

3. 取 15mL 无 RNA 酶离心管（自备）1 支，加入 2mL 裂解液，再加入 2mL 已经解冻或新鲜的血液，（冷藏血液需先轻振混匀后再加入），

轻轻颠倒混匀 8 次，再加入 200μL 消化液及 100 μL 溶液 A，充分温和振荡混匀，56℃水浴 10 分钟。 如是凝血块，可取相当于 2mL

血液量的 5x5x5mm 大小的凝血块放入 15mL 无 RNA 酶离心管，用枪头反复敲打挤压至 1x1x1mm 以内大小，再加入 2mL 裂解液，震荡

混匀 1 分钟，56℃水浴 20 分钟。

注意：提取血液量建议在 1mL-3mL，裂解液随血液量增减。如提取血凝块，请尽量打碎后再加裂解液并适当延长消化时间。

4. 取出离心管，室温放置 2 分钟。加入 3mL 无水乙醇（自备），轻轻颠倒混匀 8 次，如有半透明悬浮物，不影响 RNA 的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内，将 3625 μL 上述溶液转入吸附柱内，静置 2 分钟，5,000 rpm 离心 2 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放入收集管内，将剩余 3625 μL 上述溶液转入吸附柱内，重复步骤 5。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 3mL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 分钟，5,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，5,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。

9. 取出吸附柱，放入新的 15 mL 无 RNA 酶收集管内，加入 300 μL 洗脱液，静置 3 分钟，5,000 rpm 4℃ 离心 3 分钟，收集 RNA 溶液。

提取得到的 RNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生

理盐水冲洗，必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。