测定酶活力要注意控制哪些条件?
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(1)酶促反应过程中,要用初速度表示酶促反应速度。
(2)要规定时间、温度、pH等反应条件,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定。
(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。
(4)标本要新鲜,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。
(5)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱及蛋白沉淀剂等。
测定酶活力方法介绍:
终点法:该方式是在特定条件下,将样品中要检知的酶作用一定量的底物,然后根据反应进行到某一程度(即达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶的活力。
其一个发展是采用检测器对反应进行连续跟踪,并在反应达到某一程度时,精确地自动记录所需要的时间,这就是酶分析自动化中的固定浓度法;另一个发展是作成简便的酶检测纸片。
动力学法:该方式测定原理是在一定条件下,酶促反应速度和酶浓度成正比,因此测得反应速度就需要求得酶浓度。待测的酶浓度是影响反应速度的唯一因素,其他因素都应处于最适于酶发挥催化作用的水平,为此应选择适宜的底物浓度、缓冲体系、温度,并向反应系统中添加必要的辅助因子。
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