Question

（七）回答下列有关基因工程和酶工程的有关问题如图所示为利用现代生物技术获得能表达某蛋白酶工程菌的过

（七）回答下列有关基因工程和酶工程的有关问题如图所示为利用现代生物技术获得能表达某蛋白酶工程菌的过程．选用质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点．请回答：（1）构建含目的基因的重组质粒A时，应选用限制酶______，对______进行切割．再用______进行重组．（2）图中质粒同时用PstⅠ和ApaⅠ酶切，产生1800对碱基和8200对碱基的两种片段，如用以上四种酶同时切割此质粒，则产生600对碱基和8200对的碱基两种片段，那么用同时用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，则产生的片段有______．（3）筛选后所得到的工程菌增值后表达出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不会分泌到细胞外，因此还需要利用酶工程中的______技术获得此蛋白酶，（4）获得此蛋白酶后，利用酶的固定化技术能回收和重复利用此蛋白酶，以下属于固定化技术中的载体结合法的是______

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Answer 1

（1）目的基因上PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ切割位点，质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ切割位点．切割质粒和含目的基因的DNA需要同种限制酶．但是目的基因上也有SmaⅠ切割位点，所以选用PstI、EcoRI 切割质粒和含目的基因的DNA．构建表达载体需要DNA连接酶．    故答案为：PstI、EcoRI     质粒和含目的基因的DNA     DNA连接酶
（2）质粒同时用PstⅠ和ApaⅠ酶切，产生1800对碱基和8200对碱基的两种片段，说明质粒上含有10000个碱基对．用以上四种酶同时切割此质粒，则产生600对碱基和8200对的碱基两种片段，则说明PstⅠ和SmaⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ切割位点间的都含有600对碱基．那么用同时用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，则产生的片段有600+600=1200对碱基（PstⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ之间的碱基）和600+8200=8800对碱基（EcoRⅠ、ApaⅠ和PstⅠ之间的碱基）．    故答案为1200对碱基、8800对碱基（3）工程菌增值后表达出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不会分泌到细胞外，要想获得此蛋白酶，可以利用血红蛋白的提取和鉴定方法进行破碎细胞并分离提纯获得．    故答案为：分离提纯（4）酶本身还是溶于水的，用物理的或化学的方法使酶与水不溶性大分子载体结合或把酶包埋在其中．化学法包括结合法、交联法．吸附法和共价键法又可统称为载体结合法．A、B是包埋法，C是吸附法，D是交联法．故选C