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elisa有几种类型,原理是什么
1、类型
夹心法常用于检测大分子抗原,将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体,重复两次,洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果。
间接法常用于检测抗体,将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原,重复两次。洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器测定塑胶盘中的吸光值,以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;加入待测检体、带有酶的抗原,与塑胶孔盘上的抗体专一性键结。塑胶孔盘上固著抗体数量有限,检体中抗原量越多,带有酶的抗原可键结固著抗体就越少。
2、原理
在测定时把受检标本和酶标抗原或抗体,按不同步骤与固相载体表面抗原或抗体起反应。用洗涤方法使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。
扩展资料:
Elisa应用
Elisa生物试验敏感性高,特异性强,重复性好。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。
参考资料来源:百度百科-ELISA
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
2. ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
①双抗体夹心法
②双抗原夹心法
③间接法