Question

pcr法扩展dna循环操作的顺序是

Answer 1

变→复性→扩增。

高温变性：利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链。

低温退火：低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合。

中温延伸：当调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5'-3')的方向合成互补链。

一般的PCR反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：

利用高温（93-98℃）使双链DNA分离（熔解）。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟。

在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上（降温或称接合）。此阶段的温度通常低于引子熔点5℃。错误的黏合温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。新技术的融合型核酸聚合酶在此阶段的温度会高于熔点3~5℃，仅需时间5~10秒。